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免疫共沉淀(Co-IP)

免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法, 其基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵,将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育,促进免疫复合物的形成;随后加入能够与抗体Fc段结合的prorein A/G(预先结合固化在琼脂糖小珠上),形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物,纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白,应用Western blot 或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。

     与其它研究方法相比,免疫共沉淀最大的优势在于该体系是在生理条件下检测蛋白质之间的相互作用,因此,不仅可以检测到体内形成的天然复合体,而且可排除过表达靶蛋白所带来的假阳性。其次内源性的靶蛋白质是完全加工、修饰和成熟的蛋白质,因此,依赖于修饰的蛋白质相互作用也能被检测到。

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