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免疫组化

免疫组化(IHC)是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。

流程::

取材和组织固定;

切片;

脱蜡;

抗原修复;

血清封闭和抗体孵育;

DAB显色;

封片;

 

 

标本收集及注意事项:

石蜡切片:

*标本新鲜:一般在2h以内进行,超过2h,组织将有不同程度的自溶,其抗原或变性消失,或严重弥散。

*取材部位:除取病灶或含待检抗原部位外,还应取病灶与正常交界处,即所取组织切片中同时应有抗原阳性和阴性区,以形成自身对照。

*取材后的组织需立刻投于固定剂中固定使组织和细胞的蛋白质凝固,终止内源性或外源性酶反应,防止组织自溶或异溶,以保持原有结构和形态;对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或弥散。

冰冻切片:

*液氮中冰冻:组织投入液氮中 C)10-20sec°(-196。

*干冰中加入丙酮(或异戊烷),液体立即气化起泡,温度降至-70C ,将组织投入,若在干冰丙酮中置一盛有异戊烷的容器,组织投入该容器内结冻则更好。

*上述组织在速冻时应浸埋于OCT包埋剂或甲基纤维素糊状液内,以保护组织
-制成冻块后若需保存,应以铝箔或塑料薄膜封包,贮存于-70C冰箱。

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